wanneer de minimale nierdrempel voor bloedhemoglobine wordt overschreden, wordt een afzetting van ijzerkleuring pigment in het epitheel van de renale ingewikkelde tubuli waargenomen. Op een gegeven moment kan dit epitheel niet meer hemoglobine opnemen en dit valt samen met de minimale nierdrempel. Wanneer de injecties van bloedhemoglobine onder de minimale nierdrempel worden gehouden merken we een volledige afwezigheid van ijzerkleuring pigment in de renale tubulaire epitheel. Gegeven een afzetting van ijzer kleuring pigment in het tubulaire epitheel, zal het langzaam verdwijnen tijdens rustperioden zonder hemoglobine injecties. Bloedarmoede als gevolg van bloeden zal versnellen deze verwijdering van pigment uit het renale epitheel en dit wijst op een behoud van materiaal door de nier voor gebruik in de bouw van nieuwe hemoglobine. Pigment geven een positieve vlek voor ijzer zal worden gevonden in de lever en milt wanneer hemoglobine injecties worden gegeven, ongeacht de nierdrempel. Verwijdering van dit pigment wordt versneld door bloedarmoede als gevolg van bloeden en in de regel een bloedarmoede periode van 2 maanden op een niveau van 1/3 normaal (40 tot 50 procent hemoglobine) zal maken de milt, lever en nieren vrij van ijzer kleuring pigment. Pigment geven een positieve ijzervlek wordt vaak waargenomen in de mesenterische en lagere retroperitoneale lymfeklieren. Dit is slechts een drainage van pigment en fagocyten met inbegrip van pigment van één of ander orgaan waarin de pigmentafzetting primair was. Honden in dit laboratorium is het hemoglobinegehalte vrij hoog wanneer de dieren in een volkomen normale toestand verkeren. Het hemoglobine in het bloed is gemiddeld 120 tot 150 procent hemoglobine. Bij dergelijke honden ijzer kleuring pigment in de milt is een gemeenschappelijke bevinding en bij gelegenheid wordt waargenomen in de lever. Om een nauwkeurige basislijn voor de studie van ijzer en ijzer kleuring pigment opslag als gevolg van dieet inname moet men deze honden aan een voorlopige bloedarmoede periode van ten minste 2 maanden. Spierhemoglobine heeft een zeer lage nierdrempel en ontsnapt vrij in de urine wanneer intraveneus toegediend. Contrasterend met bloed hemoglobine deze musde hemoglobine onder identieke omstandigheden niet de afzetting van ijzer kleuring pigment in het epitheel van de niertubuli veroorzaken. Een pigment dat geen ijzerkleuringsreactie geeft kan worden gevonden in het epitheel van de ingewikkelde tubuli van de nier. Of dit te wijten is aan de voeding of andere factoren is onzeker, maar dit wijst op pigment behoud door de nieren. Tot slot willen we nogmaals benadrukken dat de nier van groot belang is voor het behoud van hemoglobine en hemoglobine split producten die vermoedelijk worden gebruikt om nieuwe hemoglobine op te bouwen.