gdy minimalny próg nerkowy dla hemoglobiny we krwi jest przekroczony, obserwuje się depozyt pigmentu barwiącego żelazo w nabłonku cewek nerkowych. W pewnym momencie nabłonek ten nie może przyjmować więcej hemoglobiny, co pokrywa się z minimalnym poziomem progu nerkowego. Gdy zastrzyki hemoglobiny krwi są utrzymywane poniżej minimalnego poziomu progu nerkowego, zauważamy całkowity brak pigmentu barwienia żelaza w nabłonku kanalików nerkowych. Biorąc pod uwagę depozyt pigmentu barwienia żelaza w nabłonku kanalikowym, powoli zniknie w okresach odpoczynku bez zastrzyków hemoglobiny. Niedokrwistość z powodu krwawienia przyspieszy to usunięcie pigmentu z nabłonka nerki, co wskazuje na zachowanie materiału przez nerki do wykorzystania w budowie nowej hemoglobiny. Pigment dający dodatnią plamę na żelazo znajduje się w wątrobie i śledzionie, gdy podaje się zastrzyki hemoglobiny, niezależnie od progu nerkowego. Usunięcie tego pigmentu przyspiesza niedokrwistość z powodu krwawienia i z reguły okres niedokrwistości 2 miesięcy na poziomie 1/3 normy (40 do 50 procent hemoglobiny) sprawi, że śledziona, wątroba i nerki będą wolne od pigmentu barwienia żelaza. Pigment dający dodatnią plamę żelaza jest często obserwowany w krezce i dolnych zaotrzewnowych gruczołach chłonnych. Jest to jedynie drenaż pigmentu i fagocytów, w tym pigmentu z jakiegoś narządu, w którym złoże pigmentu było pierwotne. W magazynie psów w tym laboratorium poziom hemoglobiny jest dość wysoki, gdy zwierzęta są w całkowicie normalnym stanie. Hemoglobina we krwi średnio 120 do 150 procent hemoglobiny. U takich psów barwienie żelaza pigment w śledzionie jest powszechnym stwierdzeniem i czasami obserwuje się w wątrobie. Aby ustalić dokładną linię bazową do badania przechowywania żelaza i pigmentu barwienia żelaza z powodu spożycia diety, należy poddać te psy okresowi wstępnej niedokrwistości wynoszącemu co najmniej 2 miesiące. Hemoglobina mięśniowa ma bardzo niski próg nerkowy i ucieka swobodnie do moczu po podaniu dożylnym. W przeciwieństwie do hemoglobiny we krwi, ta hemoglobina musde w identycznych warunkach nie powoduje osadzania się barwnika zabarwiającego żelazo w nabłonku kanalików nerkowych. Pigment nie powodujący reakcji barwienia żelaza można znaleźć w nabłonku zwiniętych kanalików nerkowych. To, czy jest to spowodowane dietą, czy innymi czynnikami, nie jest pewne, ale wskazuje to na zachowanie pigmentu przez nerki. Wreszcie chcielibyśmy ponownie podkreślić fakt, że nerka ma duże znaczenie w zachowaniu produktów podziału hemoglobiny i hemoglobiny, które prawdopodobnie są wykorzystywane do budowania nowej hemoglobiny.