Cuando se supera el umbral renal mínimo de hemoglobina en sangre, se observa un depósito de pigmento de tinción de hierro en el epitelio de los túbulos renales enrevesados. En cierto punto, este epitelio no puede absorber más hemoglobina y esto coincide con el nivel mínimo de umbral renal. Cuando las inyecciones de hemoglobina sanguínea se mantienen por debajo del umbral renal mínimo, notamos una ausencia completa de pigmento de tinción de hierro en el epitelio tubular renal. Dado un depósito de pigmento de tinción de hierro en el epitelio tubular, desaparecerá lentamente durante los períodos de descanso sin inyecciones de hemoglobina. La anemia debida al sangrado acelerará esta eliminación del pigmento del epitelio renal y esto indica una conservación del material por el riñón para su uso en la construcción de nueva hemoglobina. El pigmento que da una tinción positiva de hierro se encuentra en el hígado y el bazo cuando se administran inyecciones de hemoglobina, independientemente del umbral renal. La eliminación de este pigmento se acelera por la anemia debido al sangrado y, por regla general, un período de anemia de 2 meses a un nivel de 1/3 normal (40 a 50 por ciento de hemoglobina) liberará al bazo, el hígado y el riñón del pigmento de tinción de hierro. El pigmento que da una tinción de hierro positiva se observa con frecuencia en los ganglios linfáticos mesentéricos y retroperitoneales inferiores. Esto es simplemente un drenaje de pigmento y fagocitos, incluido el pigmento de algún órgano en el que el depósito de pigmento era primario. En perros de reserva en este laboratorio, el nivel de hemoglobina es bastante alto cuando los animales están en un estado perfectamente normal. El promedio de hemoglobina en sangre es de 120 a 150%. En estos perros, el pigmento de tinción de hierro en el bazo es un hallazgo común y, en ocasiones, se observa en el hígado. Para establecer una línea de base precisa para el estudio del hierro y el almacenamiento de pigmentos de tinción de hierro debido a la ingesta de dieta, se debe someter a estos perros a un período preliminar de anemia de al menos 2 meses. La hemoglobina muscular tiene un umbral renal muy bajo y se escapa libremente a la orina cuando se administra por vía intravenosa. En contraste con la hemoglobina sanguínea, esta hemoglobina musde en condiciones idénticas no causa el depósito de pigmento de tinción de hierro dentro del epitelio de los túbulos renales. Se puede encontrar un pigmento que no produce una reacción de tinción de hierro en el epitelio de los túbulos enrevesados del riñón. Si esto se debe a factores dietéticos u otros es incierto, pero esto indica la conservación del pigmento por el riñón. Por último, destacaríamos de nuevo el hecho de que el riñón es de considerable importancia en la conservación de la hemoglobina y de los productos fraccionados de hemoglobina que presumiblemente se utilizan para acumular nueva hemoglobina.