som vi såg i speciering är den största faktorn för att definiera arter reproduktiv isolering, brist på interbreeding med andra grupper eller reproduktiv isolering. Detta avgörande steg kan ske på många olika sätt. Vissa är lika dramatiska som bergskedjor som växer upp mellan populationer och andra är lika subtila som könscellernas kemiska inkompatibilitet.

det finns två huvudkategorier av reproduktiv isolering: prezygotisk och postzygotisk. Prezygotisk isolering sker innan bildandet av en zygot kan äga rum. I de flesta fall förekommer inte ens parning. Former av prezygotisk isolering inkluderar rumslig, beteendemässig, mekanisk och tidsmässig isolering. Postzygotisk isolering inträffar efter att medlemmar av två olika arter har parat och producerat en zygot. Avkomman till en sådan parning kallas en hybrid. Hybrider kan ofta inte reproducera sig själva, så produktionen av en hybrid anses inte vara en framgångsrik parning. Hybrider hindras från att reproducera genom utvecklingsavvikelser som hindrar dem från att mogna sexuellt, ohälsa som får de flesta att dö innan de når sexuell mognad eller genom sterilitet.