La spectrophotométrie, branche de la spectroscopie qui traite de la mesure de l’énergie rayonnante transmise ou réfléchie par un corps en fonction de la longueur d’onde. Habituellement, l’intensité de l’énergie transmise est comparée à celle transmise par un autre système qui sert de norme. Différents types de spectrophotomètres modernes couvrent de larges plages du spectre électromagnétique: rayons X, ultraviolets, visibles, infrarouges ou micro-ondes.
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Deux lois expriment la relation entre l’absorption de l’énergie rayonnante et le milieu absorbant. Selon la loi de Bouguer (ou de Lambert), chaque couche d’épaisseur égale du milieu absorbe une fraction égale de l’énergie qui le traverse. Selon la loi de la bière, la capacité d’absorption d’une substance dissoute est directement proportionnelle à sa concentration dans une solution.
La spectrophotométrie ultraviolette est particulièrement utile pour détecter les substances incolores en solution et mesurer leur concentration. La spectrophotométrie infrarouge est le plus couramment utilisée dans l’étude des structures moléculaires de composés organiques complexes.