a bevezetés Után egy különösen neuroinvasive, valamint virulens törzs a Nyugat-Nílusi vírus (WNV) az Egyesült Államok északkeleti része volt egy drámai kitörés a halálos fertőzések, a madarak kíséretében sokkal kisebb, de a riasztó számok a halálos fertőzések, a lovak meg az emberek.1,16,17,20,22 3 éven belül az újonnan bevezetett Flavi-vírus végigsöpört az észak-amerikai kontinensen, így nyomában több ezer halott madár és több ezer megerősített betegség, köztük több száz halálos kimenetelű lovak és emberek. Más háziállatok morbiditásáról és halálozásáról kevésbé számoltak be. A madár-és lóállomány 2002-ben Mississippiben tetőzött.

2002. November elején egy 2 éves, spayed Maltese terriert mutattak be a referencia állatorvosnak az epizodikus, ellenőrizetlen gördülő akut megjelenésével, amely gyorsan haladt az egész test remegése és ataxia felé. A kezdeti orális fenobarbitál-kezelés és egy rövid prednizon-kezelés minimális javulást eredményezett. Után 1 hét, az ügyet az állat-egészségügyi központhoz utalták, Állatorvosi Főiskola, Mississippi Állami Egyetem, kisasszony. A neurológiai vizsgálat a chorea jeleit mutatta, amelyek az egész testet érintő önkéntelen, szabálytalan, szaggatott véletlen mozgásokból állnak. A szemgömbök hasonló szabálytalan mozgásokat is mutattak. A tudatos propriocepció és ugráló reakciók az elülső végtagokban is enyhén csökkentek. Az akaratlan véletlen mozgásokat okozó betegségek általában az agykéreg területeit vagy a telencephalon vagy a koponya agytörzs specifikus extrapiramidális magjait érintik.10 a differenciáldiagnózis multifokális gyulladásos betegségeket tartalmazott—fertőző, nem fertőző és immunmediált. A teljes vérkép és a szérumkémia nem volt figyelemre méltó, és a cerebrospinális folyadék (CSF) analízis nem mutatott szignifikáns eltérést. Az elektroencefalogram az encephalitisre utaló változásokat tárt fel. A klinikai tünetek és az elektroencefalogram eredményei alapján a kutyát az encephalitis fertőző okaira kezelték. Az intenzív osztályon történő kórházi kezelés során a kutya nagyon izgatottá vált. A doxiciklin, klindamicin, diazepám, difenhidramin és folyadékok kezelése nem akadályozta meg az akaratlan mozgások súlyosságának fokozódását és a hipertermia időszakos periódusait (legfeljebb 108 F/42,2 C).

a Toxoplasma gondii, a Neospora caninum (ProtaTek, Chandler, AZ), AZ Ehrlichia canis és a Rickettsia rickettsii (Antech, Southaven, MO) szerológiája negatív volt, és a kutya distemper vírus és a parvovírus (Colorado Veterinary Diagnostic Laboratory, Ft. Collins, CO) védő immunitást jelzett, de nem mutatta ki az intrathecalis antitest termelést. 6 napos kórházi kezelés és kezelés után, körülbelül 2 héttel a klinikai tünetek megjelenése után, a kutyát eutanatizálták romló állapota miatt.

a boncolási vizsgálat nem mutatott ki súlyos rendellenességeket. Az agy mikroszkópos vizsgálata enyhe, multifokális, nem suppuratív meningoencephalitist mutatott ki, amely szürke anyagot vagy kevert szürke/fehér Anyag területeket, például az agytörzset érintette. Ezt a parenchyma, néha a szomszédos leptomeninges limfociták kis perivaszkuláris mandzsettái jellemezték. A neuropil enyhe mikrogliózisa gyakran kísérte a perivaszkuláris mandzsettát (ábra. 1). A gyulladás gócai, amelyek néha kétoldalúak voltak, jelen voltak a Piriform lebenyben és a kapcsolódó parahippocampal gyrusban és hippocampusban, a pons and medulla-ban, valamint a cerebelláris kéregben. Egy egyedülálló elváltozás közel a középvonal raphe a medulla szintjén oliváris magok állt egy terület nekrózis fibrin folyadékgyülem és vérzés, klaszterek makrofágok( gitter sejtek), és sok duzzadt axonok (szferoidok) egy pár kis lymphocytás mandzsetta a közelben (ábra. 2). A bielschowsky axonok módszerével pozitívan festett szferoidok.19 az egyetlen más jelentős eredmények korlátozódtak a máj, amely azt mutatta, foltos individualizációja májsejtek, citoplazmatikus eozinofília, nukleáris pyknosis, lízis hepatociták (akut diffúz mérsékelt máj nekrózis), számos binucleate hepatocyták nélkül jelentős gyulladásos sejt infiltráció. Számos kezdő élesztő pseudohyphae-val (Candida sp.) jelen voltak a gyomor nyálkahártyájában, nyálkahártya-invázió vagy gyulladás nélkül.

ábra. 1. Cerebrum; kutya. Mononukleáris gyulladásos sejtek kis perivaszkuláris mandzsettái és enyhe mikrogliózis a Piriform lebenyben. Foltos. Bar = 35 µm.

ábra. 2. Medulla oblongata; kutya. Egy terület a középvonali raphe a medulla mutatja, sok duzzadt axonok (keletkezzen) jelzi nyilak, a környező terület elhalása a vérzés, valamint a makrofágok. Foltos. Bar = 70 µm.

a WNV polimeráz láncreakcióját (PCR) rögzített agyban és rögzítetlen gerincvelőben, májban és vesében végezték. Darab formalin-fix agy súlya 30-100 mg eltávolították a medulla, közel a lesioned oldalon különböző más oldalakon, az agytörzs, agykéreg, valamint kisagy, öblíteni vízzel, majd helyezzük RNAlater™ reagens (QIAgen, Valencia, CA) legalább 1 óra előtt, RNS extrakció. A fagyasztott, nem rögzített gerincvelőből, veséből és májból vett mintákat előfeldolgozás nélkül nyerték ki. A szövetmintákat motorvezérelt pestle (PelletPestle, Kontes, Vineland, NJ) segítségével megszakították, az RNS-t pedig Trizol™ reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA) vagy RNea-sy™ mini spin oszlopok (QIAgen) segítségével extrahálták a gyártó utasításai szerint. A reverz transzkriptáz-beágyazott-polimeráz láncreakciót (rtnPCR) a beágyazott primerek alkalmazásával és a Johnson et al által leírt módszer módosításával hajtottuk végre., 12 kereskedelmi reagenskészlettel (OneStep™ RT PCR, Qiagen, Valencia, CA, and Taq SuperPak™, Sigma, St. Louis, MO). Pozitív kontroll volt 1 : 1000 hígítatlan WNV-pozitív madárszövetekből (elsősorban vese-és agyszövetekből) kivont, összevont RNS-t. A GELSTAR (Cambex, East Rutherford, NJ) alkalmazásával végzett agaróz-gél-elektroforézis után DNS-sávokat detektáltunk. Öt formalin-fix medulla-darabból három pozitív volt az rtnPCR-n, míg a rögzített agy (agykéreg, kisagy és agytörzs) és a rögzítetlen (fagyasztott) gerincvelő, vese és máj összes többi példánya negatív volt.

Immunhisztokémiát (IHC) végeztek a WNV antigén bizonyítására. A formalin-rögzített, paraffinba ágyazott (FFPE) szövetek részeit 5 µm-re vágtuk, és autosztainerrel (Dako, Carpinteria, CA) és előre csomagolt streptavidin–biotin–torma peroxidáz detektáló reagensekkel (LSAB2, Dako) festettük, a gyártó utasításai szerint. Az agy, a vese, a hasnyálmirigy, a máj, a szív, a lép, a mellékvese és a nyelv egy részét a WNV (VR-1267-AF, ATCC, Manassas, VA) Murine poliklonális antitest alkalmazásával festették a K (Dako) proteináz előkezelése után. Ez a poliklonális antitest mérsékelt diffúz háttérfestést mutatott minden szövetben, ami bonyolítja az értelmezést. Nem észleltek specifikus festést, kivéve az agyban, ahol a neuronok diffúz módon egyenletes fény citoplazmatikus festést mutattak az irreleváns monoklonális IgG1-vel festett kontrollcsúszdákhoz képest. Az eredményeket a neuronális festés magas háttérfestése és diffúz jellege miatt kétértelműnek tekintették, az intenzitás csekély változása miatt. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a kutya agyában az antigén csekély, összehasonlítva a fertőzött madárszövetekkel, ahol robusztus citoplazmatikus festést észleltek.

az Agyrészeket monoklonális antitestekkel festették a kutya distemper vírus nukleoproteinhez (CDV-NP, VMRD, Pullman, WA), negatív eredményekkel. IHC az FFPE agy veszettség vírus végeztünk egy másik laboratóriumban (Prairie diagnosztikai szolgáltatás, Saskatoon, SK, Kanada), negatív eredménnyel.

bár a WNV okozta halálos encephalitis számos madárfajban,22 lóban,8 lóban és emberben jól dokumentált,a vírus által okozott betegség 20 klinikai tünetét kutyákban ritkán dokumentálták. Azokon a területeken, ahol a WNV endémiás, a specifikus neutralizáló antitest magas prevalenciája azt jelzi, hogy a kutyák fertőzése gyakori, még akkor is, ha a klinikai betegség nem. Az egyik Dél-afrikai szerosurvey, ahol a WNV endémiás, a kutyák 37% – ának volt semlegesítő antitestje a WNV-vel szemben.5 a szerosurvey New Yorkban, közvetlenül a WNV első azonosítása után a nyugati féltekén, azt mutatta, hogy a kutyák nagyobb százaléka (10%), mint a lovak (3%) vagy az emberek (2,5%), specifikus semlegesítő antitest volt a kitörés epicentruma közelében (Queens).15 egy korábbi dél-afrikai jelentés leírta egy vírus izolálását, amelyet később WNV-ként azonosítottak egy súlyos encephalitis klinikai tüneteivel rendelkező kutya agyából.7,21 egy kísérletben három kutya WNV-vel történő fertőzése mindhárom, de mérhető virémiában tünetmentes szerokonverziót eredményezett ezen állatok közül csak az egyikben, amelyről később kiderült, hogy hiperadrenokorticizmusban szenved.5 egy újabb, az amerikai törzset alkalmazó vizsgálat mind a négy fertőzött kutyánál és nyolc macskánál alacsony szintű virémiát mutatott,2 kutyáknál klinikai tünetek nélkül, macskáknál pedig csak enyhe, átmeneti lázas betegséget.

két kortárs jelentés jelent meg súlyos WNV fertőzésről amerikai kutyákban. Buckweitz et al. leírt halál utáni bizonyíték a nyugat-nílusi vírus replikáció sok szövetek, egy 11 éves, férfi, vegyes fajta kutya a vese, a központi idegrendszer (CNS) betegség; kvantitatív reverz transzkriptáz–polimeráz láncreakció (RT-PCR) megállapította, hogy a vírusos sorozatok voltak a legtöbb bőséges a vese, majd szív, agy, tüdő -, valamint lép.6 Lichtensteiger et al. ismertesse a halál után megállapítások után euthanatization egy 8 éves, keverék kutya súlyos szomatikus betegség, amely tartalmazza szívizomgyulladás, valamint a halálos WNV encephalitis egy 3 hónapos farkas kölyök.18 mindkét jelentés dokumentálta a WNV antigén-és genetikai szekvenciáit IHC és RT-PCR alkalmazásával, több extraneuralis szövetben, amelyek nekrózis és gyulladás elváltozásaihoz társultak.

Ez a jelentés egy súlyos neurológiai betegség esetét dokumentálja egy 2 hetes központi idegrendszeri tünetekkel rendelkező fiatal felnőtt kutyában, ahol a WNV fertőzés bizonyítéka az agyra korlátozódott. Az agy szövettani elváltozásai nem specifikusak voltak, de kompatibilisek voltak a lovak,8 ember,20 és a kutyák esetében jelentett WNV encephalitis eredményeivel,6,18 mind a hely (agytörzs és medulla), mind a típus tekintetében (nem szupuratív encephalitis nekrózis területekkel). Az egyensúlyvesztés (gördülő) és az ataxia klinikai tünetei kompatibilisek lennének a cerebellomedulláris betegséggel, míg az egész test remegése az agy diffúz zavarára utal. Meningoencephalitisre utaló nyomokat találtak a Piriform lebenyben és a hippokampuszban, az agytörzsben és a kisagyban/medullában, de a prosencephalon nagy részét megkímélték. Májelhalás ebben az esetben nem bizonyított helyi vírusreplikáció (PCR és IHC negatív) valószínűleg azért, mert a súlyos visszatérő hipertermia. Nem zárható ki a betegség alatt kiürült korábbi vírusreplikáció miatti májkárosodás, bár gyulladás nem volt nyilvánvaló. Számos binucleate hepatocyta javasolt szubakut károsodást a regenerációval. A Candida élesztő jelenlétét a gyomorban az antibiotikumokkal történő kezelésnek tulajdonítható véletlen megállapításnak tekintették. Ellentétben a megállapítások Buckweitz et al.6 és Lichtensteiger et al., 18 semmilyen elváltozást, vírus nukleinsavat vagy vírus antigént nem észleltek semmilyen extraneuralis szövetben, beleértve a fagyasztott és rögzített vesét és májat ebből a kutyából.

A terület nekrózis található az agytörzs ez a kutya volt kapcsolódó honosított makrofág válasz (gitter sejtek), de nem nyílt a helyi gyulladásos beszivárog azt, amit leírt a lovak,8, hogy az elváltozás lehet, hogy van egy érrendszeri, vagy esetleg immun-mediált etiológiájú inkább, mint egy közvetlen cytolyticus vagy gyulladásos eredetű. A WNV agyi IHC-je ebben az esetben és a buckweitz et al által jelentett esetben nem volt képes meggyőzően kimutatni a vírus antigént.,6 a vírusreplikáció alacsonyabb szintjét jelzi, mint a madárszövetekben, ismét hasonlóan a lovak leleteihez.12 Lichtensteiger et al.18 nem jelentette az agy IHC-jét.

Az Amerikai WNV törzsnél a LÓFERTŐZÉSEKBEN észlelt neurológiai betegség viszonylag magasabb arányát az Italy8-hoz képest egereken végzett kísérleti vizsgálatok támasztják alá, amelyek azt mutatják, hogy az amerikai törzs nagyon neuroinvazív más törzsekkel összehasonlítva.3 Előfordulhat, hogy az egereken bizonyították, hogy az expozíció gáz-halmazállapotú érzéstelenítők CO2 növekedés WNV neuroinvasion a koncentráció-idő-függő módon,4,13 ami arra utal, hogy egyéb, a környezetre vagy a fogadó tényezők befolyásolhatják a fejlődés neurológiai betegség állatok. A klinikai betegség alacsony előfordulási gyakorisága kutyáknál a magas szeroprevalenciával szemben azt sugallja, hogy a kutyák jobban ellenállnak a neuroinváziónak, mint az emberek vagy a lovak.

extraneuralis fertőzésre utaló bizonyítékot nem találtak WNV encephalomyelitisben szenvedő lovakban8, mint ebben a kutyában. Talán ebben a Máltai terrierben az immunválasz megtisztította a vírust az extraneurális szövetekből. A bőséges vírusreplikáció jelenléte az extraneuralis szövetekben az amerikai kutyafertőzések két másik jelentésében arra utal, hogy néhány vírusreplikáció az extraneuralis szövetekben a neuroinvázió előtt történik, és hogy a vese és a szív valószínűleg célszövetek a kutyában. Buckweitz et al.6 javasoljuk vese biopszia a diagnózis WNV fertőzés kutyák, de Lichtensteiger et al.Az 18 nem talált vírusos antigént a vizsgált kutya veséjében. A vese biopsy18 klinikai értékét, vagy akár a WNV vizeletvizsgálatát, feltehetően RT-PCR alkalmazásával, még nem értékelték kritikusan.

Extraneural replikációs a nyugat-nílusi vírus az emberek extrapolálni a jelentések a halálos kimenetelű agyvelőgyulladás a címzettek a vese, a fertőzött donor kezdődött, 13-18 nappal a transzplantáció után meg a súlyos agyvelőgyulladás szív címzett,9,11, jelezve, hogy a betegség lehet továbbítani a vér vagy a szervátültetés. További bizonyíték a robusztus WNV replikáció extraneuralis szövetekben Emlősök bemutatott egy friss jelentés dokumentáló halálos WNV fertőzés három keleti Róka mókusok, bizonyítékokkal vese -, agyi, szív -, máj-és tüdő vírus replikáció.14 további vizsgálat szükséges az emlősökben előforduló WNV-fertőzések biológiájának és patofiziológiájának részleteinek tisztázásához.

a WNV Állat-és emberi egészségre gyakorolt folyamatos jelentősége ebben az országban valószínűleg magában foglalja a vírus endemikusvá válását sporadikus kitörésekkel. A közegészségügyi ügynökségek gyakran időben tájékoztatást nyújtanak az emberi betegség kitöréséről. Lehetséges, hogy a WNV elleni antitestek vizsgálata a kutya-és macskaszérumokban értékes epidemiológiai információkat szolgáltathat a WNV terjedéséről és előfordulási gyakoriságáról.