Spektrofotometri, gren av spektroskopi som omhandler måling av strålingsenergien som overføres eller reflekteres av en kropp som en funksjon av bølgelengden. Vanligvis er intensiteten av den overførte energien sammenlignet med den som overføres av et annet system som fungerer som en standard. Ulike typer moderne spektrofotometre dekker et bredt spekter av det elektromagnetiske spektret: Røntgen, ultrafiolett, synlig, infrarød eller mikrobølgeovn.
To lover uttrykker forholdet mellom absorpsjon av strålende energi og absorberende medium. Ifølge Bouguers (Eller Lamberts) lov absorberer hvert lag av samme tykkelse av mediet en lik brøkdel av energien som krysser den. Ifølge ølloven er absorpsjonskapasiteten til et oppløst stoff direkte proporsjonal med konsentrasjonen i en løsning.
Ultrafiolett spektrofotometri er spesielt nyttig for å oppdage fargeløse stoffer i oppløsning og måle konsentrasjonen. Infrarød spektrofotometri brukes mest til å studere molekylære strukturer av komplekse organiske forbindelser.