米国北東部にwest Nile virus(WNV)の特に神経侵襲的で毒性の強い株が導入された後、鳥に致命的な感染症が劇的に発生し、馬や人間には致命的な感染症がはるかに小さいが驚くべき数を伴っていました。1,16,17,20,22 3年以内に、新しく導入されたフラビウイルスは北アメリカ大陸を席巻し、馬および人間の何百もの死亡者を含む病気の確認された例の死んだ鳥そしてたくさんの莫大なたくさんを道に残しました。 他の家畜の罹患率と死亡率の報告はそれほど多くありませんでした。 2002年にはミシシッピ州で鳥と馬の症例がピークに達した。
2002年の初めに、2歳の卵巣摘出されたマルタ-テリアが、全身の振戦および運動失調に急速に進行したエピソード的で制御されていないローリングの急性発症を伴う紹介獣医師に提示された。 経口フェノバルビタールとプレドニゾンの短いコースでの初期治療は最小限の改善を与えた。 1週間後、ケースは、動物保健センター、獣医学の大学、ミシシッピ州立大学、MSに紹介されました。 神経学的検査では，全身を含む不随意，不規則，ぎくしゃくした不定運動からなる舞踏病の徴候を示した。 眼球も同様の不規則な動きを示した。 意識固有受容とホッピング反応も前肢で軽度に減少した。 不随意の不定運動を引き起こす疾患は、通常、大脳皮質の領域、または終脳の特定の錐体外路核、または頭蓋脳幹に影響を及ぼす。鑑別診断には、感染性、非感染性、および免疫媒介性の多巣性炎症性疾患が含まれていた。 完全な血球数と血清化学的性質は目立たず，脳脊髄液（ＣＳＦ）分析では有意な異常は認められなかった。 脳波で脳炎を示唆する変化を認めた。 臨床徴候および脳波の結果に基づいて、犬は脳炎の感染性原因のために治療された。 集中治療室での入院中、犬は非常に興奮しました。 ドキシサイクリン、クリンダマイシン、ジアゼパム、ジフェンヒドラミン、および流体による治療は、不随意運動の重症度および間欠的な温熱療法（最大108F/42.2C）の重症度の増加を防ぐことができなかった。Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｎｅｏｓｐｏｒａ ｃａｎｉｎｕｍ（Ｐｒｏｔａｔｅｋ，Ｃｈａｎｄｌｅｒ，Ａ Ｚ）、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃａｎｉｓ、およびＲｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ（Ａｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈａｖｅｎ，ＭＯ）の血清学的検査は陰性であり、イヌジステンパーウイルスおよびパルボウイルスの対血清およびＣＳＦ力価（Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｆｔ． コリンズ、CO）は防御免疫を示したが、髄腔内抗体産生を明らかにすることができなかった。 入院と治療の6日後、臨床徴候の発症から約2週間後、犬はその悪化した状態のために安楽死させられた。
剖検検査では肉眼的異常は認められなかった。 脳の顕微鏡検査では，灰白質または脳幹のような灰色／白質の混合領域を含む軽度の多巣性の非供給性髄膜脳炎が明らかになった。 これは実質内のリンパ球の小さな血管周囲カフスと時には隣接するレプトメニンゲによって特徴付けられた。 神経障害の軽度の微小グリオーシスはしばしば血管周囲のカフを伴った（Fig. 1). 炎症の病巣は，時には両側であったが，pyriform葉および関連する海馬傍回および海馬、橋および髄質および小脳皮質に存在していた。 Olivary核のレベルで髄質の正中線rapheに近いユニークな病変は、フィブリン滲出液と出血を伴う壊死の領域、マクロファージ（ギッター細胞）のクラスター、および近くに小さなリンパ球カフスのカップルと多くの腫れ軸索（スフェロイド）で構成されていた（Fig. 2). 軸索に対するＢｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙの方法によって陽性に染色されたスフェロイド。19他の唯一の重要な所見は、肝細胞の斑状の個別化、細胞質好酸球増多、核pyknosis、および肝細胞の溶解（急性びまん性中等度肝壊死）を示し、多数の二核肝細胞を Pseudohyphaeを有する多数の出芽酵母（Candida sp.）は、粘膜浸潤または炎症の証拠なしに胃粘液中に存在していた。p>
図。 1. 大脳;犬。 単核炎症細胞の小さな血管周囲カフスとpyriform葉の軽度の微小グリオーシスが散在しています。 彼は汚れています。 バー=35μ m。
図。 2. 延髄;犬。 多くの腫れ軸索（スフェロイド）を示す髄質の正中線のrapheの領域は、出血とマクロファージと壊死の領域を囲む矢印で示されます。 彼は汚れています。 バー=70μ m。WNVのポリメラーゼ連鎖反応（PCR）は、固定された脳および固定されていない脊髄、肝臓および腎臓に対して行われた。 30-100mgの重量を量るホルマリン固定脳の部分を、病変部位の近くの延髄および脳幹、大脳皮質および小脳の様々な他の部位から除去し、水ですすぎ、ＲＮＡ抽出 凍結した固定されていない脊髄、腎臓、および肝臓のサンプルを前処理なしで抽出した。 組織サンプルを、モーター駆動乳棒（Ｐｅｌｌｅｔｐｅｓｔｌｅ、Ｋｏｎｔｅｓ、Ｖｉｎｅｌａｎｄ、ＮＪ）を使用して破砕し、ＲＮＡを、ｔｒｉｚｏｌ（商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃ Ａ）またはＲｎｅａ−ｓｙ（商標）ｍｉｎｉ ｓｐｉｎ ｃｏｌｕｍｎ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、製造業者の説明書に従って抽出した。 Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ−ｎｅｓｔｅｄ−ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴＮＰＣＲ）は、ｎｅｓｔｅｄ ｐｒｉｍｅｒおよびＪｏｈｎｓｏｎらによって記載された方法の改変を用いて行われた。Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を用いて、市販の試薬キット（Ｏｎｅｓｔｅｐ（商標）ＲＴ ＰＣＲ、Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｃ Ａ、およびＴａｑ Ｓｕｐｅｒｐａｋ（商標）、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ． 陽性対照は1 : 固定されていないWNV陽性の鳥類組織（主に腎臓および脳）から抽出されたプールされたRNAの1,000希釈。 ＤＮＡバンドは、ｇｅｌｓｔａｒ（Ｃａｍｂｒｅｘ，Ｅａｓｔ Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ，ＮＪ）を用いたアガロースゲル電気泳動後に検出した。 ホルマリン固定髄質はｒｔｎｐｃｒで陽性であったが，固定脳（大脳皮質，小脳，脳幹）および固定されていない脊髄，腎臓および肝臓の他のすべての標本は陰性であった。免疫組織化学（IHC）は、WNV抗原を実証するために行われました。
免疫組織化学（IHC）は、WNV抗原を実証するために行われました。 ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織の切片を５μ Ｍで切断し、ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ（Ｄａｋｏ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，Ｃ Ａ）および包装済みのｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ｂｉｏｔｉｎ−ｗｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔｓ（ＬＳＡＢ２，Ｄａｋｏ）を使用して、製造業者の指示に従って染色した。 脳、腎臓、膵臓、肝臓、心臓、脾臓、副腎、および舌の切片を、プロテイナーゼＫ（Ｄａｋｏ）による前処理後に、ＷＮＶに対するマウスポリクローナル抗体（ＶＲ−１ ２ ６ ７−ＡＦ、ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖ Ａ）を用いて染色した。 このポリクローナル抗体はすべての組織において中等度のびまん性背景染色を示し，解釈を複雑にした。 特定の染色は、おそらくニューロンが拡散的に無関係なモノクローナルIgg1で染色されたコントロールスライドと比較して均一な光細胞質染色を示した脳 結果は高い背景染色と神経染色の拡散性のためにあいまいであり、強度の変化はほとんどないと考えられた。 これらの結果は，ロバストな細胞質染色が見られた感染した鳥組織と比較して，犬の脳における抗原の不足を示唆した。
脳切片はまた、イヌジステンパーウイルス核タンパク質（CDV-NP、VMRD、Pullman、WA）に対するモノクローナル抗体を用いて染色され、陰性の結果を得た。 狂犬病ウイルスに対するＦＦＰＥ脳のＩＨＣを、別の実験室（Ｐｒａｉｒｉｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓａｓｋａｔｏｏｎ，ＳＫ，Ｃａｎａｄａ）で実施し、陰性の結果を得た。
WNVによる致命的な脳炎は、多くの鳥種、22頭の馬、8頭、およびヒトによく記録されていますが、このウイルスによって引き起こされる病気の20の臨床徴候は、犬にはほとんど記録されていません。 WNVが風土病である地域では、特異的中和抗体の高い有病率は、臨床的疾患がない場合でも、犬の感染が一般的であることを示している。 WNVが風土病である南アフリカからの一つの血清調査では、犬の37％がWNVに対する中和抗体を持っていたことが示された。5西半球におけるWNVの最初の同定の直後にニューヨーク市の血清調査では、犬（10％）の割合が馬（3％）またはヒト（2.5％）よりも高いことが示された流行の震源地（クイーンズ）15南アフリカからの以前の報告では、脳炎の重篤な臨床徴候を有する犬の脳から、後にWNVとして同定されたウイルスの単離が記載されています。7,21ある実験では、wnvで三匹の犬の感染は、後にhyperadrenocorticismに苦しむことが判明したこれらの動物の一つだけで三つの測定可能なウイルス血症のすべてで無症候性seroconversion5米国株を用いたより最近の研究では、感染した4匹の犬と8匹の猫すべてで低レベルのウイルス血症が示され、2犬では臨床徴候はなく、猫では軽
米国の犬における重度のWNV感染の二つの現代的な報告が公開されています。 Buckweitz et al. 腎および中枢神経系（CNS）疾患を有する11歳、男性、混合品種の犬の多くの組織におけるWNV複製の死後の証拠を記載し、定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）6Lichtensteiger et al. 心筋炎を含む重度の体性疾患を有する8歳の混合品種の犬の安楽死後の死後の所見と、3ヶ月のオオカミの子犬の致命的なWNV脳炎を記述する。これらの報告はいずれも、壊死および炎症の病変に関連する複数の硬膜外組織において、それぞれＩＨＣおよびＲＴ−ＰＣＲを用いて、ＷＮＶの抗原および遺伝的配列を文書化した。
この報告書は、WNV感染の証拠が脳に限定されていたCNS徴候の2週間の期間を有する若い成犬の重度の神経疾患の症例を文書化している。 脳の組織学的病変は非特異的であったが、馬で報告されたWNV脳炎の所見と互換性があり、8人、20人、犬で報告された6人、18人の報告は、位置（脳幹および髄質）およ バランス喪失（ローリング）および運動失調の臨床徴候は小脳髄質疾患と互換性があるが、全身の振戦は脳のよりびまん性の障害を示唆している。 髄膜脳炎の証拠は、pyriform葉と海馬、脳幹、および小脳/髄質で発見されたが、前脳の多くを免れた。 局所ウイルス複製の証拠がない本症例の肝壊死（ＰＣＲおよびＩＨＣ陰性）は，重度の再発温熱療法によるものと考えられた。 炎症は明らかではなかったが、病気の間にクリアされた以前のウイルス複製による肝障害を排除することはできません。 多数の二核肝細胞は再生を伴う亜急性損傷を示唆した。 胃内のカンジダ酵母の存在は抗生物質による治療に起因する偶発的な所見と考えられた。 Buckweitz et al.の調査結果とは対照的である。およびＬｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｇｅｒ ｅ ｔ ａ ｌ．、18病変、ウイルス核酸、またはウイルス抗原は、この犬からの凍結および固定された腎臓および肝臓を含む任意の神経外組織で検出されなかった。
この犬の脳幹に見られる壊死領域は、局所的なマクロファージ応答（ギッター細胞）と関連していたが、馬に記載されているように、病変が直接的な細胞溶解性または炎症性病因ではなく、血管またはおそらく免疫媒介性病因を有する可能性があることを示唆する明白な局所炎症性浸潤ではなかった8。 脳上のWNVに対するIHCは、この場合およびBuckweitz et al.によって報告された場合には、ウイルス抗原を説得力のある形で実証することができなかった。、6は、鳥の組織で見られるよりもウイルス複製のレベルが低いことを示し、再び馬での所見と同様である。12Lichtensteiger et al.18は脳のIHCを報告しなかった。
イタリアのものと比較してWNVの米国株と馬の感染症で見られる神経学的疾患の比較的高い率8は、米国株が他の株と比較して非常に神経侵襲3マウスにおける追加の研究では、ガス状麻酔薬およびCO2への暴露は、濃度および時間依存的にWNV神経浸潤を増加させることが示されている、4、13 高い血清価に直面して犬に見られる臨床疾患の発生率が低いことは、犬が人間または馬よりも神経侵襲に対してより耐性があることを示唆して
この犬のようにWNV脳脊髄炎8を有する馬には、神経外感染の証拠は見られなかった。 おそらく、このマルタテリアでは、免疫応答は、神経外組織からウイルスをクリアしていました。 米国犬感染症の他の二つの報告における神経外組織における豊富なウイルス複製の存在は、いくつかのウイルス複製が神経浸潤前に神経外組織で起 Buckweitz et al.イヌにおけるＷＮＶ感染の診断のための腎生検が示唆されるが、Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｇｅｒ ｅ ｔ ａ ｌ．18は、彼らが検査した犬の腎臓にウイルス抗原を発見しませんでした。 おそらくRT-PCRを用いたwnvの腎生検18または尿検査の臨床的価値は、まだ批判的に評価されていない。
ヒトにおけるWnvの神経外複製は、移植後13-18日に始まった感染したドナーからの腎臓のレシピエントにおける致命的な脳炎の報告から、心臓レシピエントにおける重度の脳炎から外挿することができ、9、11は、疾患が血液または臓器移植を介して伝達されることができることを示している。 ほ乳類の神経外組織における堅牢なWNV複製のさらなる証拠は、腎臓、脳、心臓、肝臓、および肺ウイルス複製の証拠と、三つの東キツネリスにおける致命的なWNV感染を文書化する最近の報告書に提示されている。哺乳類におけるWNV感染症の生物学および病態生理の詳細を解明するためには、さらなる研究が必要である。
この国の動物および人間の健康へのWNVの継続的な重要性は、おそらく散発的な流行で風土病になるウイルスを伴うでしょう。 公衆衛生機関は、多くの場合、人間の病気の発生に関するタイムリーな情報を提供します。 イヌおよびネコ血清中のＷＮＶに対する抗体の分析は，ＷＮＶの広がりおよび発生率に関する貴重な疫学的情報を提供する可能性がある。
謝辞
私たちは、技術支援のためのステファニー*メイズとチェルシー*ミラーと財政支援のためのミシシッピ獣医診断研究所システ
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