sen jälkeen, kun erityisen neuroinvasiivinen ja virulentti Länsi-Niilin virus (WNV) – kanta tuotiin Koillis-Yhdysvaltoihin, tapahtui dramaattinen kuolemaan johtaneiden infektioiden taudinpurkaus linnuissa, ja siihen liittyi paljon pienempiä mutta hälyttäviä määriä kuolemaan johtaneita tartuntoja hevosilla ja ihmisillä.1,16,17,20,22 kolmen vuoden kuluessa Uusi Flavivirus oli pyyhkäissyt Pohjois-Amerikan mantereen yli jättäen jälkeensä lukemattomia tuhansia kuolleita lintuja ja tuhansia vahvistettuja tautitapauksia, mukaan lukien satoja hevosten ja ihmisten kuolemantapauksia. Muiden kotieläinten sairastavuutta ja kuolleisuutta on raportoitu vähemmän. Lintujen ja hevosten tapaukset olivat huipussaan Mississippissä vuonna 2002.

marraskuun alussa 2-vuotiaalle, steriloidulle Maltanterrierille esiteltiin lähettävälle eläinlääkärille akuutti episodinen, hallitsematon vieriminen, joka eteni nopeasti koko kehon vapinaan ja ataksiaan. Ensimmäinen hoito suun kautta fenobarbitaali ja lyhyt kurssi prednisoni antoi minimaalinen parannus. 1 viikon kuluttua tapaus siirrettiin Animal Health Center, College of Veterinary Medicine, Mississippi State University, MS. Neurologisessa tutkimuksessa havaittiin merkkejä Koreasta, joka koostui tahattomista, epäsäännöllisistä, nykivistä satunnaisista liikkeistä, jotka koskivat koko kehoa. Silmäpalloissa näkyi myös samanlaisia arvaamattomia liikkeitä. Myös eturaajoissa tietoiset proprioskeptaatiot ja hyppimisreaktiot vähenivät lievästi. Tahdosta riippumattomia satunnaisia liikkeitä aiheuttavat sairaudet vaikuttavat yleensä aivokuoren alueisiin tai spesifisiin telenkefalonin eli aivoaivojen ekstrapyramidaaliytimiin.10 erotusdiagnoosi sisälsi multifokaalisia tulehdussairauksia—tarttuvia, tarttumattomia ja immuunivälitteisiä. Täydelliset verenkuva-ja seerumikemikaalit eivät olleet merkittäviä, eikä aivo-selkäydinnesteanalyysissä havaittu merkittäviä poikkeavuuksia. Aivosähkökäyrä paljasti aivotulehdukseen viittaavia muutoksia. Kliinisten oireiden ja aivosähkökäyrän tulosten perusteella koiraa hoidettiin enkefaliitin tarttuvien syiden vuoksi. Sairaalahoidon aikana teho-osastolla koira hermostui pahasti. Doksisykliinillä, klindamysiinillä, diatsepaamilla, difenhydramiinilla ja nesteillä ei pystytty estämään tahattomien liikkeiden vakavuutta eikä ajoittaisia hypertermiajaksoja (jopa 108 F/42, 2 C).

Toxoplasma gondii: n, Neospora caninumin (ProtaTek, Chandler, AZ), Ehrlichia canis: n ja Rickettsia rickettsii: n (Antech, Southaven, MO) serologia oli negatiivinen, ja koiran penikkatautiviruksen ja parvoviruksen (Colorado Veterinary Diagnostic Laboratory, Ft. Collins, CO) osoitti suojaavaa immuniteettia, mutta ei paljastanut intratekaalista vasta-ainetuotantoa. 6 päivän sairaalahoidon ja hoidon jälkeen, noin 2 viikon kuluttua kliinisten oireiden alkamisesta, koira lopetettiin sen heikkenevän tilan vuoksi.

Ruumiinavaustutkimuksessa ei havaittu vakavia poikkeavuuksia. Aivojen Mikroskooppitutkimus paljasti lievän, multifokaalisen, ei-suppuratiivisen meningoenkefaliitin, johon liittyi harmaata ainetta tai sekamuotoista harmaata / valkoista ainetta kuten aivorungossa. Tälle oli ominaista lymfosyyttien pienet perivaskulaariset hihansuut parenkyymissä ja joskus viereisissä leptomeningeissä. Lievä mikroglioosi neuropiili usein mukana perivaskulaarinen cuffing (Kuva. 1). Joskus molemminpuolisia tulehduspesäkkeitä oli pyriformisessa lohkossa ja siihen liittyvässä parahippokampuksessa gyruksessa ja hippokampuksessa, ponsissa ja medullassa sekä pikkuaivokuoressa. Ainutlaatuinen vaurio lähellä keskiviivan raphe ydintä tasolla olivary ytimet koostui alueen nekroosin kanssa fibriini effuusio ja verenvuoto, klustereita makrofagien (gitter solut), ja monet turvonneet aksonit (spheroids) kanssa pari pientä lymfosyyttinen hihansuut lähellä (Kuva. 2). Sferoidit värjäytyivät positiivisesti bielschowskyn menetelmällä aksoneille.19 ainoat muut merkittävät löydökset rajoittuivat maksaan, jossa ilmeni maksasolujen hajanaista yksilöitymistä, sytoplasmaista eosinofiliaa, ydinpyknoosia ja maksasolujen hajoamista (akuutti diffuusi keskivaikea maksanekroosi), johon liittyi lukuisia kaksitumaisia maksasoluja ja ilman merkittävää tulehdussolujen infiltraatiota. Lukuisat orastava hiiva pseudohyphae (Candida sp.) oli mahalaukun Limassa ilman merkkejä limakalvon invaasiosta tai tulehduksesta.

kuva. 1. Iso-Britannia; koira. Hajanaisia pieniä perivaskulaarisia hihansuita mononukleaarisia tulehdussoluja ja lievää mikroglioosia pyriformilohkossa. Hän tahraa. Bar = 35 µm.

kuva. 2. Ydinkärki; koira. Alue keskiviivan raphe, ydin näyttää monet turvonneet aksonit (spheroidit) merkitty nuolilla, ympäröivä alue nekroosi verenvuoto ja makrofagit. Hän tahraa. Bar = 70 µm.

polymeraasiketjureaktio (PCR) WNV: lle suoritettiin kiinteillä aivoilla ja kiintymättömällä selkäytimellä, maksassa ja munuaisissa. Formaliinikiinteät aivot, joiden paino oli 30-100 mg, poistettiin ydinreunasta lähellä lesinoitunutta kohtaa ja muista aivorungon, aivokuoren ja pikkuaivojen kohdista, huuhdeltiin vedellä ja laitettiin RNAlater™ – reagenssiin (QIAgen, Valencia, CA) vähintään 1 tunti ennen RNA-uuttoa. Näytteet jäädytetyistä kiintymättömistä selkäytimestä, munuaisesta ja maksasta otettiin ilman esikäsittelyä. Kudosnäytteitä häirittiin moottorikäyttöisellä survimella (PelletPestle, Kontes, Vineland, NJ), ja RNA erotettiin Trizol™-reagenssilla (Invitrogen, Carlsbad, CA) tai rnea-sy™ mini spin colonnes (QIAgen) valmistajan ohjeiden mukaan. Käänteiskopioijaentsyymi-sisäkkäinen-polymeraasiketjureaktio (rtnPCR)suoritettiin käyttäen sisäkkäisiä alukkeita ja Johnson et al.,12 kaupallisilla reagenssisarjoilla (OneStep™ RT PCR, Qiagen, Valencia, CA ja Taq SuperPak™, Sigma, St. Louis, MO). Positiivinen kontrolli oli 1 : 1000 laimennosta yhdistettyä RNA: ta, joka on uutettu sekoittamattomista WNV-positiivisista lintukudoksista (pääasiassa munuaisista ja aivoista). DNA-vyöhykkeet havaittiin Agaroosigeelielektroforeesin jälkeen käyttäen Gelstaria (Cambrex, East Rutherford, NJ). Kolme viidestä palasta formaliinin-kiinteä ydin oli positiivinen rtnPCR, kun taas kaikki muut näytteet kiinteän aivojen (aivokuori, pikkuaivot, ja aivorungon) ja kiintymätön (jäädytetty) selkäytimen, munuaisten ja maksan olivat negatiivisia.

immunohistokemia (IHC) tehtiin WNV-antigeenin osoittamiseksi. Formaliinin kiinteiden parafiiniin upotettujen kudosten osat leikattiin 5 µm: n tarkkuudella ja värjättiin autostainerilla (Dako, Carpinteria, CA) ja valmiiksi pakatuilla streptavidiini–biotiini–piparjuuriperoksidaasin tunnistusreagensseilla (LSAB2, Dako) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Aivojen, munuaisten, haiman, maksan, sydämen, pernan, lisämunuaisen ja kielen osia värjättiin käyttämällä hiiren polyklonaalista vasta-ainetta WNV: tä varten (VR-1267-AF, ATCC, Manassas, VA) proteinaasi K: n (Dako) esihoidon jälkeen. Tämä polyklonaalinen vasta-aine osoitti Kohtalaista diffuusia taustavärjäystä kaikissa kudoksissa, mikä vaikeutti tulkintaa. Mitään erityistä värjäytymistä ei havaittu, paitsi mahdollisesti aivoissa, joissa neuroneilla oli diffusoidusti yhdenmukaista valon sytoplasmavärjäystä verrattuna epäolennaisella Monoklonaalisella IgG1: llä värjättyihin kontrollilevyihin. Tuloksia pidettiin epäselvinä, koska niissä oli paljon taustavärjäystä ja neuronien värjäytyminen oli hajanaista, ja niiden voimakkuus vaihteli vain vähän. Nämä tulokset viittasivat niukasti antigeenin koiran aivoissa, verrattuna infektoituneisiin lintukudoksiin, joissa nähtiin vankkaa sytoplasmavärjäystä.

aivojen osia värjättiin myös käyttämällä monoklonaalista vasta-ainetta koiran penikkatautiviruksen nukleoproteiinia (CDV-NP, VMRD, Pullman, WA) vastaan, ja tulokset olivat negatiiviset. IHC on FFPE brain for rabies virus tehtiin toisessa laboratoriossa (Prairie Diagnostic Service, Saskatoon, SK, Kanada), negatiivisin tuloksin.

vaikka WNV: n aiheuttama kuolemaan johtava aivotulehdus on hyvin dokumentoitu monilla lintulajeilla,22 hevosella,8: lla ja ihmisellä,20: tä tämän viruksen aiheuttaman taudin kliinistä merkkiä on harvoin dokumentoitu koirilla. Alueilla, joilla WNV on endeeminen, korkea esiintyvyys erityisiä neutraloivia vasta-aineita osoittaa, että infektio koirilla on yleinen, vaikka kliininen tauti ei. Yksi serosurvey Etelä-Afrikasta, jossa WNV on endeeminen, osoitti 37% koirista oli neutraloivia vasta-aineita WNV.5 serosurvey New Yorkissa, heti ensimmäisen tunnistamisen jälkeen WNV läntisellä pallonpuoliskolla, osoitti, että suurempi osa koirista (10%) kuin hevoset (3%) tai ihmiset (2,5%) oli erityisiä neutraloivia vasta lähellä episentrum epidemian (Queens).15 aiempi raportti Etelä-Afrikasta kuvattu eristäminen virus, myöhemmin tunnistettu WNV, aivoista koiran vakavia kliinisiä oireita enkefaliitti.7,21 eräässä kokeessa kolmen koiran WNV-tartunta aiheutti oireettoman serokonversion kaikissa kolmessa mutta mitattavissa olevassa viremiassa vain yhdessä näistä eläimistä, jonka todettiin myöhemmin kärsivän hyperadrenokortismista.5 uudemmassa tutkimuksessa,jossa käytettiin yhdysvaltalaista kantaa, havaittiin alhainen viremia kaikilla neljällä koiralla ja kahdeksalla kissalla, 2, joilla ei ollut kliinisiä oireita koirilla ja vain lievä, ohimenevä kuumetauti kissoilla.

on julkaistu kaksi ajankohtaista raporttia vakavasta WNV-infektiosta yhdysvaltalaisilla koirilla. Buckweitz ym. kuvattu kuoleman jälkeistä näyttöä WNV replikaation monissa kudoksissa 11-vuotias, uros, sekarotuinen koira munuaisten ja keskushermoston (CNS) sairaus; kvantitatiivinen käänteiskopioijaentsyymi–polymeraasiketjureaktio (RT-PCR) todettiin, että virus sekvenssit olivat runsaimpia munuaisissa, jonka jälkeen sydän, aivot, keuhko, ja perna.6 Lichtensteiger ym. kuvaile kuolemanjälkeiset löydökset eutanatisoinnin jälkeen 8-vuotiaalla sekarotuisella koiralla, jolla oli vaikea somaattinen sairaus, johon kuului sydänlihastulehdus sekä kuolemaan johtava WNV-enkefaliitti 3 kuukauden ikäisellä sudenpennulla.18 molemmat raportit dokumentoitu antigeeni ja geneettiset sekvenssit WNV, käyttäen IHC ja RT-PCR, vastaavasti, useissa ulkopuolisissa kudoksissa liittyvät leesiot nekroosi ja tulehdus.

tässä raportissa dokumentoidaan tapaus, jossa nuorella aikuisella koiralla oli vaikea neurologinen sairaus, jonka KESKUSHERMOSTOVAIKUTUKSET kestivät 2 viikkoa ja jossa näyttö WNV-infektiosta rajoittui aivoihin. Histologiset leesiot aivoissa olivat epäspesifisiä mutta yhteensopivia havaintojen WNV enkefaliitti raportoitu hevosilla,8 ihmisillä,20 ja kaksi raporttia koirilla,6,18 sekä suhteen sijainti (aivorunko ja ydin) ja tyyppi (ei-märkivä enkefaliitti alueilla nekroosi). Kliiniset oireet tasapainon menetys (liikkuvan) ja ataksia olisi yhteensopiva pikkuaivot, kun taas koko kehon vapina viittaavat enemmän hajanainen häiriö aivoissa. Viitteitä meningoenkefaliitista löytyi pyriformisesta lohkosta ja hippokampuksesta, aivorungosta ja pikkuaivoista/ytimestä, mutta säästyi suurelta osin prosenkefalonilta. Maksanekroosi ilman merkkejä viruksen paikallisesta replikaatiosta (PCR ja IHC-negatiiviset) johtui mahdollisesti vakavasta toistuvasta hypertermiasta. Aiemmasta viruksen replikaatiosta johtuvaa maksavauriota, joka korjaantui sairauden aikana, ei voida sulkea pois, vaikka tulehdusta ei havaittu. Lukuisat kaksitumaiset hepatosyytit viittasivat subakuuttiin vaurioon regeneraation yhteydessä. Candida-hiivan esiintymistä vatsassa pidettiin antibioottihoidosta johtuvana satunnaisena löydöksenä. Vastakohtana havainnot Buckweitz et al.6 ja Lichtensteiger et al.,18 ei vaurioita, virus nukleiinihapot, tai virusantigeeni havaittiin missään ekstraneuraalikudosten lukien jäädytetty ja kiinteä munuaisten ja maksan tämän koiran.

tämän koiran aivorungosta löytyneeseen nekroosin alueeseen liittyi paikallinen makrofagivaste (gitterisolut), mutta ei avointa paikallista tulehdusinfiltraattia,mikä viittaa, kuten hevosilla on kuvattu, 8 siihen, että leesiolla voi olla verisuonten tai mahdollisesti immuunivälitteinen etiologia eikä suora sytolyyttinen tai tulehduksellinen etiologia. IHC aivojen WNV: n osalta ei pystynyt vakuuttavasti osoittamaan virusantigeenia tässä tapauksessa ja buckweitzin ym. raportoimassa tapauksessa., 6 viittaa siihen, että virusten replikaatio on vähäisempää kuin lintujen kudoksissa, mikä on jälleen samanlainen kuin hevosilla tehdyt löydökset.12 Lichtensteiger ym.18 ei raportoinut aivojen IHC: tä.

verrattain suurempi neurologisten sairauksien esiintyvyys yhdysvaltalaisen WNV-kannan aiheuttamissa hevoseläinten infektioissa8 verrattuna italiaan8 tukevat hiirillä tehdyt kokeelliset tutkimukset, jotka osoittavat, että Yhdysvaltojen kanta on erittäin neurovasteinen muihin kantoihin verrattuna.3 lisätutkimukset hiirillä ovat osoittaneet,että altistuminen kaasumaisille anestesia-aineille ja CO2 lisää WNV-neuroinvasiota pitoisuudesta ja ajasta riippuvalla tavalla.4,13 viittaa siihen, että muut ympäristöön tai isäntään liittyvät tekijät voivat vaikuttaa eläinten neurologisten sairauksien kehittymiseen. Kliinisten sairauksien Vähäinen esiintyvyys koirilla suuren seroprevalenssin aikana viittaa siihen, että koirat ovat vastustuskykyisempiä neuroinvasionille kuin ihmiset tai hevoset.

näyttöä ekstraneuraalisesta infektiosta ei todettu hevosilla, joilla oli WNV-enkefalomyeliitti8, kuten tällä koiralla. Ehkä tällä Maltanterrierillä immuunivaste oli poistanut viruksen ulkoisista kudoksista. Läsnäolo runsaasti viruksen replikaation ekstraneuraalinen kudosten kaksi muuta raporttia Yhdysvaltain koiran infektioita viittaa siihen, että jotkut viruksen replikaatio tapahtuu ekstraneuraalinen kudosten ennen neuroinvasion ja että munuaisten ja sydämen ovat todennäköisesti kohdekudosten koira. Buckweitz ym.6 ehdottaa munuaisten biopsia diagnoosin WNV infektio koirilla, mutta Lichtensteiger et al.18 tutkitun koiran munuaisesta ei löytynyt virusantigeenia. Munuaisbiopsy18: n kliinistä arvoa tai edes virtsakoetta WNV: lle, oletettavasti RT-PCR: llä, ei ole vielä arvioitu kriittisesti.

WNV: n Ekstraneuraalinen replikaatio ihmisillä voidaan ekstrapoloida ilmoituksista,jotka koskevat kuolemaan johtavaa enkefaliittia infektoituneilta luovuttajilta,jotka ovat saaneet munuaispotilaita 13-18 päivää elinsiirron jälkeen, ja vakavaa enkefaliittia sydänpotilaalla, 9, 11, mikä viittaa siihen, että tauti voi tarttua veren tai elinsiirron välityksellä. Lisätodisteita vankka WNV replikaatio ulkopuolisissa kudoksissa nisäkkäiden on esitetty äskettäin raportti dokumentointi kuolemaan WNV infektio kolme Itä kettu oravia, todisteet munuaisten, aivojen, sydämen, maksan, ja keuhkojen virus replikaatio.14 lisätutkimusta tarvitaan nisäkkäiden WNV-infektioiden biologian ja patofysiologian yksityiskohtien selventämiseksi.

WNV: n jatkuva merkitys eläinten ja ihmisten terveydelle tässä maassa johtunee siitä, että viruksesta tulee endeeminen satunnaisten tautiepidemioiden myötä. Kansanterveyslaitokset antavat usein ajankohtaista tietoa ihmisten tautiepidemioista. On mahdollista, että WNV: n vasta-aineiden analysointi koirien ja kissan seerumeista voisi antaa arvokasta epidemiologista tietoa WNV: n leviämisestä ja esiintymisestä.

Kiitämme Stephanie maysia ja Chelsea Milleriä teknisestä avusta ja Mississippi Veterinary Diagnostic Laboratory Systemiä taloudellisesta tuesta.

Iwamoto, M, Jernigan, DB, Guasch, A, Trepka, MJ, Blackmore, CG, Hellinger, WC, Pham, SM, Zaki, s, Lanciotti, RS, Lance-Parker, SE, DiazGranados, CA, Winquist, AG, Perlino, ca, Wiersma, s, Hillyer, KL, Goodman, JL, Marfin, Aa, Chamberland, me, Petersen, LR: Länsi-Niilin viruksen leviäminen elinluovuttajalta neljälle elinsiirtopotilaalle. N Engl J Med 348:2196-2203, 2003
Google Scholar | Crossref | Medline | ISI