som vi så I speciering, er hovedfaktoren ved definition af arter reproduktiv isolering, mangel på krydsning med andre grupper eller reproduktiv isolering. Dette afgørende trin kan forekomme på mange forskellige måder. Nogle er lige så dramatiske som bjergkæder, der vokser op mellem befolkninger, og andre er lige så subtile som kønscellernes kemiske uforenelighed.

der er to hovedkategorier af reproduktiv isolation: præsygotisk og postsygotisk. Præsykotisk isolering sker, før dannelsen af en kindtand kan finde sted. I de fleste tilfælde forekommer parring ikke engang. Former for præsykotisk isolation omfatter rumlig, adfærdsmæssig, mekanisk og tidsmæssig isolation. Postsygotisk isolation opstår, efter at medlemmer af to forskellige arter har parret sig og produceret en kindtand. Afkom af en sådan parring kaldes en hybrid. Hybrider er ofte ude af stand til at reproducere sig selv, så produktionen af en hybrid betragtes ikke som en vellykket parring. Hybrider forhindres i at reproducere ved udviklingsmæssige abnormiteter, der forhindrer dem i at modnes seksuelt, dårligt helbred, der får de fleste til at dø, før de når seksuel modenhed, eller ved sterilitet.