Hjortefluer lå mellem 100 og 800 æg i partier på vegetation nær vand eller fugt. Under larvestadiet, der varer et til tre år, lever de af små skabninger eller rådnende organisk materiale nær eller i vandet. Efter et puppestadium dukker de op som voksne i slutningen af foråret og sommeren. Mens mandlige hjortefluer samler pollen, lever kvindelige hjortefluer af blod, som de har brug for for at producere æg. Kvinder fodrer primært på pattedyr. De tiltrækkes af bytte ved syn, lugt eller påvisning af kulilte. Andre tiltrækningsmidler er kropsvarme, bevægelse, mørke farver og lys om natten. De er aktive under direkte solskin og timer, når temperaturen er over 22 liter C (71,6 liter). Ved fodring bruger hunnerne sakslignende mandibler og maksiller til at lave et krydsformet snit og derefter skød blodet op. Deres bid kan være smertefuldt. Antikoagulanter i spytens spyt forhindrer blod i at størkne og kan forårsage alvorlige allergiske reaktioner. Parasitter og sygdomme, der overføres af hjortefluen, inkluderer tularæmi, miltbrand, anaplasmose, heste infektiøs anæmi, svinekoleraog filiariasis. DEET er ikke et effektivt afstødningsmiddel.rovdyr af hjortefluen (og andre Tabanidae) inkluderer redebyggende hveps og hornets, guldsmede og nogle fugle inklusive killdeer. De kan ikke kontrolleres af mennesker, fordi insekticider ikke kan anvendes i de følsomme vådområder, hvor larverne typisk udvikler sig. Derudover kan voksne have udviklet en betydelig afstand fra, hvor æggene blev lagt. Fangstanordninger og beskyttelsesbeklædning, såsom langærmede skjorter og hatte, kan hjælpe med at undgå irritation og bid af aggressive hjortefluer.